B2.1.2.5 每次试验均应有阳性血清及生理盐水作阳性和阴性对照。
B2.1.3 结果判断:
B2.1.3.1 阴性反应为红细胞全部沉入孔底,肉眼见一边缘光滑,致密的小圆点。
B2.1.3.2 阳性反应。
++++红细胞形成薄层凝集,边缘呈现不规则的皱褶。
+++ 红细胞形成薄层凝集,充满整个孔底。
++ 红细胞形成薄层凝集,面积较+++者小。
+ 红细胞大部分沉集于孔底,形成一圆点,周围有少量凝集的红细胞,肉眼见周边模糊(或中间出现较为明显的空白点)。
B2.1.4 反应标准:以血清1∶10稀释出现阳性反应可判为血吸虫病患者。
B2.2 二氨酚致敏法
B2.2.1 抗原:为日本血吸虫虫卵可溶性抗原(SEA)及成虫尿素溶解性抗原(AUA)混合而成,其比例为SEA10mg/L十AUA20mg/L。所用绵羊或人“O”型红细胞经5%戊二醛醛化后,用二氨酚法致敏。致敏后的红细胞中加入含10%蔗糖及1%正常兔血清的pH7.2PBS,分装后冻干保存。每批致敏红细胞以阳性参考血清作效价测定滴度达1:640~1280,阴性血清及盐水对照不出现凝集者为合格。
B2.2.2 操作方法
B2.2.2.1 冻干致敏红细胞为每支0.5mL,使用前用1mL生理盐水稀释摇匀。
B2.2.2.2 在“V”型(90°)血凝板中,将受检血清用生理盐水做1:5~1:640倍比稀释。
B2.2.2.3 除1∶5稀释孔外,其余每孔加滴(0.03mL)致敏红细胞,振荡30s,静置60~90min观察反应结果。
B2.2.3 反应标准:以110稀释孔呈强凝集(+++)为阳性反应。
B3 酶联免疫吸附试验(ELISA)
B3.1 常用方法
B3.1.1 抗原:虫卵可溶性抗原。
B3.1.2 操作方法
B3.1.2.1 于微量聚苯乙烯塑料板的凹孔中加入0.2mL以pH9.6碳酸盐缓冲液作1∶3000(或1∶1000,随抗原效价而定)稀释的虫卵抗原,置4℃过夜。
B3.1.2.2 次日倾去抗原,用含有0.05%吐温-20的磷酸缓冲盐水(PBS/TpH7.4,0.01mol/L)洗涤3次,每次5min。
B3.1.2.3 于凹孔中加入以PBS/T作1∶200稀释的受检者血清0.2mL,37℃ 2h。
B3.1.2.4 倾去血清,以PBS/T洗涤3次,每次5min。
B3.1.2.5 加入以PBS/T作1∶1000稀释的辣根过氧化物酶(HRP)-标记结合物0.2mL,37℃ 2h。
B3.1.2.6 倾去酶标记结合物,以PBS/T洗涤3次,每次5min。
B3.1.2.7 加入0.2mL邻苯二胺(OPD)底物溶液〔10mg OPD+pH5.0柠檬酸缓冲液25mL+30%过氧化氢(H(下标始)2(下标终)O(下标始)2(下标终))10μL〕0.2mL,37℃,30min。