为促进深圳市有效应对突发公共卫生事件，规范我市对甲型H1N1（2009）流感病毒的实时荧光RT-PCR检测，保障动物及人类的生命健康，制定本指导性技术文件。
本指导性技术文件中的主要技术指标参照美国农业部制订的《REAL-TIME RT-PCR FOR THE DETECTION OF H1N1 2009 N1 GENE》的标准，结合深圳市动物和人类甲型H1N1（2009）流感病毒快速筛选检测的实际需求确定。
本指导性技术文件中的甲型H1N1（2009）流感病毒实时荧光RT-PCR检测可以采用等效一步法或二步法，本标准以一步法为例规定各项操作，等效二步法可参见相应的说明书。
动物甲型H1N1（2009）流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法
1 范围
本指导性技术文件规定了动物甲型H1N1（2009）流感病毒实时荧光RT-PCR的检测方法。
本指导性技术文件适用于快速检测咽拭子、鼻拭子、泄殖腔拭子、组织样品等临床样品中甲型H1N1（2009）流感毒株。本指导性技术文件同样适用于人甲型H1N1（2009）流感病毒实时荧光RT-PCR检测。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 18088 出入境动物检疫采样
GB/T 18936 高致病性禽流感诊断技术
GB19442 高致病性禽流感防治技术规范
GB19489 实验室生物安全通用要求
SN/T 1193 基因检验实验室技术要求
3 术语与缩略语
下列缩略语适用于本文件。
Ct值 Cycle threshold，反应管的荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数
DEPC diethylprocarbonate，二乙基焦磷酸酯
FAM 6-carboxy-fluorescein，6-羧基荧光素
PBS 磷酸盐缓冲液
pH1N1（2009） pandemic H1N1 virus of 2009，甲型H1N1（2009）流感病毒
RT-PCR reverse transcription Polymerase Chain Reaction，反转录聚合酶链式反应
4 仪器与试剂
4.1 仪器与材料
--实时荧光PCR仪；
