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腹泻病人样品应争取在发病早期，服用抗菌药物之前采取，并尽快送至实验室。采便方法可用灭菌棉试采取刚排出的新鲜水样便，亦可用直肠试子插入直肠内3～5厘米采取。采取得当，拭子变成湿润并染有一些粪便颜色，避免采便量过少。
采得的样品可立即接种于分离培养基。剧烈腹泻病人的水样便含有大量病菌，直接分离培养不难检出阳性。为提高检出率，将样品作碱性蛋白胨水（APW）增菌培养后再作分离。如果样品不能在2小时内送到实验室，则可装入Cary—Blair运送培养基内送检，如果运送时间不超过24小时，可用APW运送。在实验室里APW管经6～8小时增菌后作分离培养，夏日可将运送时间计算在内。
样品送检单上应填写病人姓名、年龄、地址、主要的临床症状，取样日期及时间，与样品一起送交实验室。
2．分离培养和初步鉴定
（1）使用选择性培养基和／或非选择性培养基进行分离培养。
常用的强选择性培养基：
庆大霉素琼脂（GTA）pH8．4～8．5
四号琼脂pH8．4
TCBS琼脂pH8．6
常用的非选择性或弱选择性培养基
碱性琼脂（AA）pH8．4
碱性胆盐琼脂（AB琼脂）pH8．4
（2）分离培养方法
培养基的使用，可根据各地具体条件和各实验室的实践经验来选择。近年来多采用APW增菌和强选择性培养基分离。如在GTA平皿上，肠内细菌和革兰氏阳性细菌的生长受到抑制。霍乱弧菌生长快，菌落大，35～37℃培养4～5小时原划线处即有菌苔生长，8～10小时可长出小菌落，16～18小时菌落直径达2毫米。菌落略带灰色，半透明，扁平、光滑湿润。取菌落作玻片凝集容易制成悬液，凝集状态良好。室温放置后，菌落继续增大，略带黄色，中心厚呈深灰色周边透明。
所有粪便样品，原则上都应经过增菌培养，尤其是恢复期病人，带菌者或用过抗菌药物病人的样品含菌量少，单靠直接分离不易检出。
（3）初步鉴定试验
霍乱弧菌的鉴定以血清学性状为主，采用玻片凝集试验进行鉴定。可疑菌落先用O1群霍乱弧菌多价血清作玻片凝集试验，凝集阳性的菌落，再用分型血清凝集，以确定小川型或稻叶型。在O1群血清中不凝集的可疑菌落，再用O139群诊断血清作玻片凝集。为快速初步鉴定，粪便样品在GTA或AA平皿上培养4～6小时，从平皿上挑受融和生长的部分作玻片凝集试验。
值得注意的是，制备O139诊断血清时，需要经过与O139群有交叉反应的O22群与O155群菌株以及粗糙型霍乱弧菌的吸收，以除去其交叉反应的凝集素。如果使用未经吸收的O139血清作诊断时，在确定为O139群之前，必须使用经过吸收的特异的O139血清复查，以排除是这些交叉凝集菌群的可能性。
用于玻片凝集的血清效价：一般将原血清用生理盐水稀释成含有1︰40～1︰50（不低于1︰32，不高于1︰64）效价的稀释血清作玻片凝集。如原血清效价为1︰1280，使其成为1︰50，即1280×1／50＝25．6，即将原血清稀释成1︰25使用。将稀释血清滴加在清洁的玻璃片或划有方格的平皿内，再以接种环或小的接种环取可疑菌落放在血清近旁，磨匀后混入血清内制成均匀悬液。很快（一般不超过10秒钟）出现肉眼可见明显凝集者为阳性。以生理盐水为对照，检查有无自凝。
用上述特异性诊断血清进行凝集试验，结合临床和／或流行病学资料，即可作出霍乱病例的确诊。
3．其它有用的试验
在没有所需诊断血清，为检查分离的菌株是否为弧菌时可作下列试验，有助于进一步作O1群或O139群的鉴定。
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