未免疫的健康鸵鸟血清无血凝抑制作用，各稀释倍数均出现红细胞凝集现象；禽副粘病毒感染或免疫的鸵鸟血清能抑制禽副粘病毒对红细胞的凝集作用。凡能使8HA的抗原凝集红细胞作用完全抑制的血清最高稀释倍数，称为该血清的血凝抑制价
（如表二的血凝抑制价为1∶64）。
3．判定标准
1）判定时应首先观察各对照孔是否完全符合；
2）红细胞凝集：红细胞分散在孔底四周呈均匀的颗粒状凝集且布满整个孔底，
判为血凝作用为阳性“十”；
3）无凝集或凝集抑制：红细胞集中于孔底中央呈点状，判血凝作用为阴性“-”，或判血凝抑制作用为阳性；
4）血凝抑制价：凡能使抗原的血凝作用完全受到抑制的最高血清稀释倍数；
5）被检血清的血凝抑制价在1∶8以上者，判为阳性反应；
6）最后判定时间与感作时间有关。温度高时感作时间短，15min即可；温度低时可适当延长，但最长不得超过30min。
鸵鸟新城疫血凝抑制试验操作规程（试行）
一、试验材料
1．抗原：选择对红细胞凝集作用强的鸡新城疫弱毒株接种鸡胚，收获尿囊液和
羊水制备。
2．红细胞：采健康鸡血液5～10ml，于少许阿氏液中摇匀，以生理盐水洗3～5次，每次3000rpm离心5～10分钟，将血浆、白细胞充分洗去至上清液清亮，再将沉淀的红细胞用生理盐水稀释成1％的红细胞悬浮液。
3．被检血清：采集被检鸵鸟血液分离血清，试验前56℃灭活30分钟。
4．生理盐水：灭菌的生理盐水或PBS（pH6．5～7．2）。
5．90度V型反应板，微量加样器。
二、试验操作
1．血凝试验（HA）：
取干净的微量血凝反应板（V型）一块，按表一进行操作，每孔加生理盐水25ul，孔1加鸵鸟新城疫抗原25ul，用移液器反复吹打混匀三次；再吸出25ul于孔2，吹
打混匀后吸出25ul于孔3，依次稀释到孔10，孔10混匀后吸出25ul弃掉。孔11、12不
加生理盐水作空白对照。然后加入1％的红细胞悬浮液25ul，充分振荡后置于室温，
每5分钟观察一次，15分钟后判定结果并作好记录。
抗原的血凝价为凡能使红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍数，即该病毒的血凝滴度。如表一血凝价为1∶128，因此能使鸡红细胞完全凝集的最高稀释倍数和病毒液25ul为该病毒的1个血凝单位（HA），在进行血凝抑制试验时，病毒工作浓度为4HA。如该试验的病毒血凝价为1∶128，按其孔号数（孔7）倒退两孔的稀释倍数（孔
5），即该病毒液作1∶32稀释。
2．血凝抑制试验（HI）：
取干净的微量血凝滴定板（V型）一块，按表二进行操作，每孔加生理盐水25ul，孔1加被检血清25ul，用移液器反复吹打混匀三次，再吸出25ul于孔2，吹打混匀
后吸出25ul于孔3，依次稀释到孔8，孔8混匀后吸出25ul弃掉，孔9作为阳性血清对照，孔10作为阴性血清对照，孔11不加血清作为抗原对照，孔12不加生理盐水作空白对照。然后各孔加入含4HA的抗原25ul，充分振荡后室温静置感作5～6分钟；再加
入1％的红细胞悬浮液25ul，充分振荡后置于室温，每5分钟观察一次，15分钟后判定结果，并作好记录。
健康鸵鸟血清无抑制作用，各稀释倍数均无红细胞凝集现象；感染鸵鸟或免疫鸵鸟血清能抑制对红细胞的凝集作用，凡能使4HA的抗原凝集红细胞作用完全抑制的
血清最高稀释倍数，称为该血清的血凝抑制价（如表二的血凝抑制价为1∶64）。
3．判定标准
1）判定时应首先观察各对照孔是否完全符合。
2）红细胞凝集：红细胞分散在孔底四周呈均匀的颗粒状凝集且布满整个孔底，
判血凝作用为阳性（十）。
表一 新城疫血凝试验 （单位：ul）
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│ 孔号 │ 1 │ 2 │ 3 │ 4 │ 5 │ 6 │ 7 │ 8 │ 9 │ 10 │ 11│ 12│
├──────┼───┼───┼───┼───┼───┼────┼────┼────┼────┼────┼───┼───┤
│抗原稀释度 │ 1∶2│ 1∶4│ 1∶8│1∶16 │1∶32 │ 1∶64 │ 1∶128│ 1∶256│ 1∶512│1∶1024 │对照 │对照 │
├──────┼───┼───┼───┼───┼───┼────┼────┼────┼────┼────┼───┼───┤
│ 生理盐水 │ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25│ 25│
├──────┼───┼───┼───┼───┼───┼────┼────┼────┼────┼────┼───┼───┤
│ 抗原 │ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25│ │
├──────┼───┼───┼───┼───┼───┼────┼────┼────┼────┼────┼───┼───┤
│ 1％红细胞 │ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25│ 25│
└──────┴───┴───┴───┴───┴───┴────┴────┴────┴────┴────┴───┴───┘
室温15分钟，每5分钟观察一次
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│ 判定 │ + │ + │ + │ + │ + │ + │ + │ - │ - │ - │ - │ - │
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表二 新城疫血凝抑制试验 （单位：ul）
┌──────┬───┬───┬───┬────┬────┬───┬────┬────┬────┬────┬─────┬───┐
│ 孔号 │ 1 │ 2 │ 3 │ 4 │ 5 │ 6 │ 7 │ 8 │ 9 │ 10 │ 11 │ 12│
│ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │
├──────┼───┼───┼───┼────┼────┼───┼────┼────┼────┼────┼─────┼───┤
│血清稀释度 │ 1∶2│ 1∶4│ 1∶8│ 1∶16 │ 1∶32 │1∶64 │ 1∶128│ 1∶256│ 阳性 │ 阴性 │ 对照 │对照 │
├──────┼───┼───┼───┼────┼────┼───┼────┼────┼────┼────┼─────┼───┤
│ 生理盐水 │ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25│
├──────┼───┼───┼───┼────┼────┼───┼────┼────┼────┼────┼─────┼───┤
│ 被检血清 │ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25│ 25 │ 25 │ (25)│ (25)│ │ │
├──────┼───┼───┼───┼────┼────┼───┼────┼────┼────┼────┼─────┼───┤
│ 抗原 │ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ │
└──────┴───┴───┴───┴────┴────┴───┴────┴────┴────┴────┴─────┴───┘
室温感作5—6分钟
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│ 1％红细胞 │ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25│
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室温15分钟，每5分钟观察一次
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│ 判定 │ - │ - │ - │ - │ - │ - │ + │ + │ + │ + │ + │ + │
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