抗原的血凝滴度是凡能使1%的鸡红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍数;因此,
能使红细胞完全凝集的最高稀释倍数的病毒液25ul称为1个血凝单位(HA)。如该抗
原的血凝单位为1∶128/25ul。
在进行禽副粘病毒血凝抑制试验时,病毒的工作浓度应为4HA。因为该试验的抗
原的血凝单位为1∶128/25ul,按其孔号数(孔7)倒退2孔的稀释倍数(孔5,1∶16),作为该病毒的工作浓度:1∶32/25u1。
2.血凝抑制试验(HI):
取干净的微量滴定板(V型)一块,按表二进行操作:每孔加25ul生理盐水,孔
1加待检血清25ul,用移液器反复吹打混匀三次;吸出25ul于孔2,吹打混匀后吸出25ul于孔3;如此依次稀释到孔8,孔8混匀后吸出25ul弃掉。孔9作为阳性血清对照,孔10作为阴性血清对照,孔11不加任何血清而作为抗原对照,孔12不加抗原和任何血清,只加生理盐水作空白对照。各孔加入1%的红细胞悬浮液25ul,充分振荡后
置于室温;每5min观察一次,15~30min后判定结果,并作好记录。
表二 禽副粘病毒血凝抑制试验 (单位:ul)
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│ 孔号 │ 1 │ 2 │ 3 │ 4 │ 5 │ 6 │ 7 │ 8 │ 9 │ 10 │ 11│ 12│
│ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │
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│血清稀释度 │ 1∶2│ 1∶4│ 1∶8│1∶16 │1∶32 │1∶64 │ 1∶128│ 1∶256│ 阳性 │ 阴性 │抗原 │对照 │
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│ 生理盐水 │ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 50│ 75│
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│ 被检血清 │ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ (25)│ (25)│ │ │
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│ 4HA抗原 │ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25│ │
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室温感作5—6min
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│ 1%红细胞 │ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25│ 25│
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室温15min,每5min观察一次
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│ 判定举例 │ - │ - │ - │ - │ - │ - │ + │ + │ + │ + │ + │ + │
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