禽流感血凝抑制试验操作程序（试行）
一、试验材料
1．抗原：禽流感病素H5、H7型抗原；
2．阴、阳性对照血清。
3．红细胞：无菌采集鸡血液5～10ml于少许阿氏液中摇匀，以洗涤3～5次，每次3000rpm离心10min，将血浆、白细胞充分洗去至上清液清亮，再将沉淀的红细胞稀释成1％的红细胞悬浮液（RBC）；
4．被检血清：采集被检鸵鸟血液，离心分离血清，56℃灭活30min；
5．稀释液：灭菌的生理盐水或PBS（pH7．2～7．4）
6．90度V型反应板，微量加样器。
二、试验操作
1．血凝试验（HA）：
取干净的微量滴定板（V型）一块，按表一进行操作：每孔加25ul生理盐水，孔
1加禽流感抗原25ul，用移液器反复吹打混匀三次；吸出25ul于孔2，吹打混匀后吸出25ul于孔3；如此依次稀释到孔10，孔10混匀后吸出25ul弃掉。孔11、12不加抗原
，只加生理盐水作空白对照。加入1％的红细胞悬浮液25ul，充分振荡后置于室温；
每5min观察一次，15～30min后判定结果，并作好记录。
表一 禽流感血凝试验 （单位：ul）
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│ 孔号 │ 1 │ 2 │ 3 │ 4 │ 5 │ 6 │ 7 │ 8 │ 9 │ 10 │ 11│ 12│
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│抗原稀释度│ 1∶2│ 1∶4│ 1∶8│1∶16 │1∶32 │1∶64 │ 1∶128│ 1∶256│ 1∶512│1∶1024 │对照 │对照 │
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│生理盐水 │ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 50│ 50│
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│ 抗原 │ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ │ │
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│1％红细胞 │ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25│ 25│
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室温15min，每5min观察一次
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│ 判定举例│ + │ + │ + │ + │ + │ + │ + │ - │ - │ - │ - │ - │
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抗原的血凝滴度是凡能使1％的鸡红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍数；因此，
能使红细胞完全凝集的最高稀释倍数的病毒液25ul称为1个血凝单位（HA）。如该抗
原的血凝单位为1∶128／25ul。
在进行禽流感血凝抑制试验时，病毒的工作浓度应为8HA。因为该试验的抗原的
血凝单位为1∶128／25ul，按其孔号数（孔．7）倒退3孔的稀释倍数（孔4 1∶16）
