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3.1样品固定取组织样品，浸泡于4%多聚甲醛混合液中，固定24小时。将固定好的组织修成适当大小的块。
3.2 组织脱水、透明、包埋将固定好的组织取出，稍作修正后，置于脱水筐中，用梯度酒精脱水，70%乙醇过夜，80%乙醇2小时，90%乙醇2小时，95%乙醇1液1小时，95%乙醇2液1小时，无水乙醇1液1小时，无水乙醇2液1小时，无水乙醇3液1小时，冬青油（即水杨酸甲酯）透明过夜。透明完毕后，在蜡缸1缸和2缸中分别浸蜡40分钟。浸蜡后，将组织包埋于旧蜡中。
3.3 载玻片处理将多聚赖氨酸涂布于免洗载玻片表面，室温自然干燥，放置于载玻片盒中备用。
3.4 切片、贴片、烤片制备组织切片时，厚度不超过5μm，将切好的组织在42℃水浴中充分展开后，贴于载玻片上，贴片后平放一段时间，贴于载玻片上，贴片后在漂烘仪内烤片30分钟，防止组织脱落，然后置染色架上60℃烤片，过夜。
3.5 脱蜡将组织切片置于二甲苯1液10分钟，二甲苯2液10分钟，二甲苯∶乙醇（1：1）液5分钟，无水乙醇1液5分钟，无水乙醇2液5分钟，95%乙醇3分钟，90%乙醇3分钟，80%乙醇3分钟，70%乙醇5分钟。最后用蒸馏水浸泡3次，每次5分钟。
3.6 消除内源性过氧化物酶30%H2O220ml＋甲醇溶液180ml混合，室温避光浸泡30分钟。然后用蒸馏水洗3次，每次5分钟。
3.7 抗原修复将组织切片置柠檬酸钠缓冲液（0.01mol/L，pH值6.0，1000ml中含柠檬酸三钠3g、柠檬酸0.4g）中，在微波炉中高火加热至沸腾，再低火维持20分钟，取出后自然冷却至室温，然后用PBS（0.02mol/L，pH值7.4）清洗3次，每次5分钟。
3.8 封闭将5%BSA封闭液滴加在组织上，50μl/片，于室温封闭20分钟。
3.9 加一抗封闭完成后，用吸水纸擦干载玻片反面和正面组织周围的血清，滴加一抗（PCV2Cap蛋白单克隆抗体），置2～8℃冰箱中反应过夜。
3.10 加二抗将载玻片从冰箱中取出，37℃温箱内复温30分钟。然后放入 PBS（0.02mol/L，pH值7.4）中洗1次，静置3分钟，擦干组织周围的PBS后滴加二抗（羊抗鼠IgG），置温箱37℃感作20分钟。
3.11 加SABC将样品从温箱中取出，PBS（0.02mol/L，pH值7.4）洗2次，每次5分钟，擦干组织周围的PBS，滴加试剂SABC，37℃作用30分钟。PBS（0.02mol/L，pH值7.4）洗4次，每次5分钟。
3.12 加显色剂将组织片周围的PBS吸干，每片组织滴加DAB显色液50μl，置室温显色。用蒸馏水终止显色，显色结束后，在PBS（0.02mol/L，pH值7.4）中浸泡10分钟。
3.13 苏木素复染将显色后的组织用苏木素染液复染3分钟，立即用蒸馏水清洗干净，再用梯度酒清脱水，即70%乙醇5分钟，80%乙醇5分钟，90%乙醇5分钟，95%乙醇1液5分钟，95%乙醇2液5分钟，无水乙醇1液5分钟，无水乙醇2液5分钟，二甲苯1液5分钟，二甲苯2液中充分透明5分钟，取出后在二甲苯未挥发完全时用中性树胶封片，置通风橱中晾干。
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