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农业部公告第1802号――关于批准青岛宝依特生物制药有限公司等8家单位申报的鸭病毒性肝炎冻干蛋黄抗体等2种兽药产品为新兽药,并核发《新兽药注册证书》的公告

  【汞类防腐剂残留量测定】按现行《中国兽药典》附录进行测定,应符合规定。
  【规格】(1)100ml/瓶(2)20ml/瓶(3)6ml/瓶(4)4ml/瓶
  【贮藏与有效期】2~8℃保存,有效期为12个月。

  附注
  1猪圆环病毒2型ELISA抗体检测

  1.1 用稀释液将待检血清分别作10倍、20倍、40倍……递进稀释。

  1.2 取抗原包被板(根据样品多少,可拆开分次使用),每孔加入稀释好的洗涤液200μl,静置3分钟后,弃掉液体,并在吸水纸上拍干。再分别将稀释好的待检血清和对照样品取100μl加入到抗原包被板孔中,待检样品作1孔,阴性对照和阳性对照各设2孔,每孔100μl。轻轻振匀孔中样品(勿溢出),置37℃温育30分钟。

  1.3 弃掉孔中液体,每孔加入稀释好的洗涤液200μl,静置3分钟后,倒掉液体,再在吸水纸上拍干,共计洗涤5次。

  1.4 每孔加入羊抗猪酶标二抗100μl,置37℃下温育30分钟。

  1.5 弃掉孔中液体,洗涤5次,方法同1.3。切记每次在干净吸水纸上拍干。

  1.6 每孔先加底物液A50μl、再加底物液B50μl,混匀,18~25℃避光显色10分钟。

  1.7 每孔加终止液50μl,10分钟内测定结果(测定前在震荡器上轻轻震动一下)。

  1.8 在酶标仪上测各孔OD630nm值。试验成立的条件是阳性对照孔平均OD630nm值≥0.7,阴性对照孔平均OD630nm值<0.3。

  1.9 判定样品OD630nm值>0.42,判为阳性;样品OD630nm值介于0.38~0.42之间,判为可疑;样品OD630nm值<0.38,判为阴性。

  2 猪圆环病毒2型特异性PCR

  2.1 引物根据GenBank猪圆环病毒2型ORF2基因序列(No.AF027217)设计,引物序列为:P1:5-CACGGATATTGTAGTCCTGGT-3’;P2:5-CGCACCTTCGGATATACTGTC-3’。引物由上海生物工程有限公司合成,预期扩增片段大小为494bp。

  2.2 病毒DNA的提取按MagaBioVirusDNAPurificationKit(BioerTechnologyCo.,Ltd)的说明书进行。

  2.3 PCR反应采用25μl总反应体系,上游引物 P11μl、下游引物P21μl,l0×PCRBufferⅡ(MgCl2plus)2.5μl,dNTP Mixture(各2.5mmol/L)4μl,LA Taq(2.5U/μl)0.25μl,模板DNA5μl,纯化水11.25μl。反应参数:95℃预变性5分钟;95℃变性1分钟,54℃退火40秒,72℃延伸1分钟,共30个循环;72℃延伸10分钟。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳,置紫外灯下观察。

  3 组织学及免疫组织化学检测(SABC染色)剖杀所有仔猪,取腹股沟淋巴结和肠系膜淋巴结,进行组织学及免疫组织化学检测,具体方法如下:


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