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1.2 洗涤液的配制使用前，将20倍浓缩洗涤液恢复至室温，并摇动使沉淀溶解（最好在37℃水浴中加热5～10分钟），然后用蒸馏水作20倍稀释，混匀，置2～8℃，可保存7日。
1.3 样品稀释液的配制将脱脂奶粉2.5g溶于50ml稀释液A中，作为待检血清和对照血清的稀释液。
1.4 待检血清和对照血清的稀释将待检血清在血清稀释板中用样品稀释液按1：40的比例稀释（195μl样品稀释液中加5μl待检血清）。阳性和阴性对照血清用样品稀释液按1：40稀释（234μl样品稀释液中加6μl对照血清，吹打均匀，各设2孔）。
1.5 操作步骤
1.5.1 取抗原包被板（根据样品多少，可拆开分次使用），每孔加入稀释好的洗涤液200μl，静置3分钟后，弃去洗涤液，并在吸水纸上拍干，共计洗涤2次。再将稀释好的待检血清、阴性对照血清和阳性对照血清各取100μl加入到抗原包被板孔中。待检血清设1孔，阴性对照和阳性对照各设2孔。轻轻振匀孔中样品（勿溢出），置37℃下温育30分钟。
1.5.2 弃去孔中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200μl，静置3分钟后，弃去洗涤液，并在吸水纸上拍干，重复洗板5次。
1.5.3 每孔加入羊抗猪酶标二抗100μl，置37℃下温育30分钟。
1.5.4 洗涤5次，方法同1.5.2。
1.5.5 每孔先加1滴底物液A（约50μl）、再加1滴底物液B（约50μl），混匀，室温避光显色10分钟。
1.5.6 每孔加1滴终止液（约50μl），10分钟内测定结果。
2 判定 在酶标仪上测各孔OD630nm值，试验成立的条件是；阳性对照孔OD630nm值均应≥0.8，且＜2.0；阴性对照孔OD630nm值均应＜0.3。如果样品OD630nm值≥0.35，判为阳性；如果样品OD630nm值＜0.35，则判为阴性。
【规格】2块（192孔）/盒
【贮藏与有效期】2～8℃保存，有效期为9个月。
附注：
1 阳性质控血清的标准
【性状】橙黄或淡黄色液体，无臭、无味，有少量悬浮物。
【无菌检验】按现行《中国兽药典》附录进行检验，应无菌生长。
【效价测定】将阳性质控血清作1：5、1：10、1：20…1：1280稀释，用猪链球菌2型ELISA抗体检测试剂盒检测，抗体效价测定结果为阳性的最高稀释度应不低于1：640。
【规格】1ml/管
2 阴性质控血清的标准
2.1 猪链球菌2型阴性血清
【性状】橙黄或淡黄色液体，无臭、无味，有少量悬浮物。
【无菌检验】按现行《中国兽药典》附录进行检验，应无菌生长。
【效价测定】用猪链球菌2型EL ISA抗体检测试剂盒重复8孔检测，OD630nm值均应＜0.3。
【规格】1ml/管
2.2 猪链球菌1型阳性血清
【性状】橙黄或淡黄色液体，无臭、无味，有少量悬浮物。
【无菌检验】按现行《中国兽药典》附录进行检验，应无菌生长。
【效价测定】用琼脂扩散试验重复3次检测，效价均应不低于1：4；用猪链球菌2型ELISA抗体检测试剂盒重复8孔检测，OD630nm值均应＜0.3。
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