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附注
1 易感雏鸭标准鸭场未使用过鸭病毒性肝炎疫苗，且未发生过鸭病毒性肝炎；蛋黄中鸭病毒性肝炎中和抗体效价＜1：4的种蛋所孵化的雏鸭。
2 辛酸残留量检测方法（一次萃取比色法）
2.1 原理游离脂肪酸能与铜离子结合形成脂肪酸的铜盐而溶于氯仿中，其量与游离脂肪酸含量成正比。用铜试剂测定其中铜离子的含量，即可推算出游离脂肪酸的含量。
2.2 设备仪器分光光度计、振荡器、普通离心机。
2.3 试剂
2.3.1 氯仿（AR）
2.3.2 pH值6.4磷酸盐缓冲液（1/30mol/L）
2.3.2.1 1/30mol/L磷酸二氢钾溶液取磷酸二氢钾4.54g，加蒸馏水至1L。
2.3.2.2 1/30mol/L磷酸氢二钠溶液取磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）11.94g，加去离子水至1L。
2.3.2.3 取1/30mol/L磷酸二氢钾溶液73.3ml，加入1/30mol/L磷酸氢二钠溶液26.7ml，混合。
2.3.2.4 显色剂称取二乙基二硫代氨基甲酸钠［N（C2H5）2CS2Na］100mg，加正丁醇至100ml。置2～8℃可保存7～14日。
2.3.2.5 铜试剂取1mol/L三乙醇胺溶液9份，1mol/L醋酸溶液1份及64.5g/L硝酸铜溶液10份，混合即成。混合液2～8℃可保存21日，三乙醇胺、醋酸及硝酸铜溶液可长期分别保存。
2.3.2.6 辛酸标准液［0.1%（V/V）］精确吸取辛酸（BR）10μl与9.99ml氯仿充分混匀即可。
2.3.2.7 蛋黄氯仿提取液按1份蛋黄与3份pH值6.4磷酸盐缓冲液混匀后，加入4份氯仿充分振摇，3250转/分钟离心10分钟，取其上清液即可。
2.4 操作
2.4.1 标准曲线制定
2.4.1.1 取洁净干燥的具塞试管4支，编为1～4号。每管中加入氯仿5.0ml，然后依次加入辛酸原液8、4、2和1μl，加塞后充分振摇混匀。
2.4.1.2 另取洁净干燥的具塞试管5支，编为1～5号。1～4号管分别从1.4.1.1对应号数的试管中吸取0.3ml氯仿辛酸混合溶液，5号试管中加入去离子水0.3ml。
2.4.1.3 各管分别加入0.1ml磷酸盐缓冲液（1/30mol/L，pH值6.4），铜试剂2.0ml，1～4号管加氯仿5.7ml，5号管加氯仿6.0ml。
2.4.1.4 加塞，振摇15分钟，静置10分钟后，以3250转/分钟离心5分钟。
2.4.1.5 吸去上清液及蛋白凝块，弃之。
2.4.1.6 各管吸氯仿层4.0ml于另一组洁净试管中，加入显色剂0.5ml，充分混合后放置5分钟。
2.4.1.7 在440nm波长处比色，以空白管调零，读取各管吸光度（A）值。
2.4.1.8 绘制标准曲线以辛酸含量为X轴，A440为Y轴绘制辛酸浓度（A440）标准曲线。
2.4.2 待测样品测定
2.4.2.1 抽样按0.05%抽样。超滤浓缩也在采样前应充分搅拌均匀。
2.4.2.2 检测
2.4.2.2.1 取洁净干燥具塞试管5支（每增加1个样，试管增加2支），编为1～5号，1、2号管分别加入待检样品0.3ml（平行试验），3、4和5号管分别加入0.1%辛酸标准液0.3ml、蛋黄氯仿提取液0.3ml和去离子水0.3ml。
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