色谱柱：C₁₈ 色谱柱，4.6mm ×250 mm，5 mm；
　　流动相：乙腈＋水（60＋40）（体积比）；
　　流速：1.0 mL/min；
　　检测波长：225 nm；
　　进样量：10mL。
　　5.2.2　标准曲线的绘制
　　吸取10mL氧化三苯基膦溶液（3.3），注入高效液相色谱仪，确定氧化三苯基膦的保留时间。衍生化反应结束后，立即开始色谱分析，分别吸取10mL过氧化氢标准工作液衍生液（5.1.2）注入高效液相色谱仪，2h内完成上机分析。在上述色谱条件下测定其峰面积，记录氧化三苯基膦的峰面积，以标准溶液浓度为横坐标、氧化三苯基膦的峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。
　　5.2.3　样品中过氧化氢的测定
　　衍生化反应结束后，立即开始色谱分析，吸取10mL样液（5.1.2）注入高效液相色谱仪，2h内完成上机分析。在上述色谱条件下测定其峰面积。利用回归方程式计算样液中过氧化氢的浓度。
　　5.3　平行实验
　　按以上步骤操作，对同一样品独立进行测定获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

6　结果计算

　　W＝（DrV/ m*10⁶）*100
　　式中：w-- 化妆品中过氧化氢的含量，%；
　　r-- 由回归方程式计算待测样液（5.1.3）中过氧化氢的质量浓度，mg/ L；
　　V -- 样品定容体积，mL；
　　D -- 样品稀释倍数；
　　m -- 样品取样量，g。

7　回收率与精密度

　　方法的回收率为99.9%～107.3%，相对标准偏差小于7%（n＝6）。

8　色谱图

　　图　标准工作液色谱图（略）
　　（1.氧化三苯基膦；2.三苯基膦）

　　附录：

1　范围

　　本附录规定了过氧化氢含量的标定方法。

2　过氧化氢含量的测定原理

　　H₂O₂分子中含有一个过氧键-O-O-，既可在一定条件下作为氧化剂，又可在一定条件下作为还原剂。在稀H₂SO₄介质中，室温条件下KMnO₄可将H₂O₂定量氧化，反应方程式为：
　　5H₂O₂ ＋ 2MnO₄^-＋6H^＋＝2Mn^2＋ ＋ 5O₂ ＋ 8H₂O
　　该反应开始时速度较慢，滴入第一滴后溶液不易褪色，随着反应的进行，生成的Mn^2＋对反应有催化作用，反应速度加快，故能顺利滴定，当滴定到溶液中有稍过量的MnO₄^- 后，溶液出现微红色显示终点，通过消耗KMnO₄溶液的浓度和体积，可以计算过氧化氢的含量。

3　试剂和溶液

　　3.1　硫酸溶液，取10mL浓硫酸缓慢加入150mL水中，摇匀，备用。
　　3.2　高锰酸钾标准滴定溶液，0.1mol/L。
　　3.2.1　高锰酸钾标准溶液的配制
　　称量1.0g 固体KMnO₄，置于大烧杯中，加水至300mL（由于要煮沸使水蒸发，可适当多加些水），煮沸约1小时，静置冷却后用微孔玻璃漏斗或玻璃棉漏斗过滤，滤液装入棕色细口瓶中，贴上标签，一周后标定。保存备用。
　　3.2.2　高锰酸钾标准溶液的标定
　　准确称取0.13～0.16g基准物质Na₂C₂O₄三份，分别置于250mL的锥形瓶中，加约30mL水和3mol·L^-1H₂SO₄10mL，盖上表面皿，在石棉铁丝网上慢慢加热到70～80℃（刚开始冒蒸气的温度），趁热用高锰酸钾溶液滴定。开始滴定时反应速度慢，待溶液中产生了Mn^2＋后，滴定速度可适当加快，直到溶液呈现微红色并持续半分钟不褪色即终点。根据Na₂C₂O₄的质量和消耗KMnO₄溶液的体积计算KMnO₄浓度。用同样方法滴定其他二份Na₂C₂O₄溶液，相对平均偏差应在0.2％以内。

4　仪器和设备

　　4.1　酸式滴定管，50mL。

5　实验步骤

　　称取 0.3g过氧化氢，精确值0.0001g，置于250mL锥形瓶中，加入20～30mL水，振摇，加入100mLH₂SO₄溶液，振摇，用KMnO₄标准溶液[c（1/5KMnO₄）＝0.1mol/L]滴定至微红色，半分钟内不退色为终点。记录消耗KMnO₄溶液的体积，平行测定3次，极差应小于0.1mL，根据KMnO₄标准溶液浓度和消耗的体积，计算过氧化氢的含量。

6　计算公式

　　过氧化氢质量分数按下式计算：
　　W＝【（Vc*17.01）/ m*10³】*100
　　式中：w -- 过氧化氢的质量分数，%；
　　V -- 高锰酸钾标准滴定溶液的体积，mL；
　　c --高锰酸钾标准滴定溶液的浓度，mol/L；
　　17.01--过氧化氢的摩尔质量[M（1/2H₂O₂）]，g/mol；
　　m -- 样品取样量，g；

　　附件14：

1　适用范围

　　本方法规定了采用液相色谱法测定化妆品中苄索氯铵（121-54-0）、劳拉氯铵（139-07-1）和西他氯铵（122-18-9）的方法。
　　本方法适用于膏霜类、乳液类和水类化妆品中苄索氯铵、劳拉氯铵和西他氯铵的测定。

2　方法提要

　　样品在经过提取后，经高效液相色谱仪分离，二极管阵列检测器检测，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。本方法对苄索氯铵、劳拉氯铵和西他氯铵的检出限、定量下限、检出浓度和最低定量浓度如表1所示。
　　表1

	苄索氯铵	劳拉氯铵	西他氯铵
检出限	0.07mg	0.04mg	0.03mg
定量下限	0.3mg	0.2mg	0.1mg
检出浓度（0.5g样品）	11mg /g	8mg /g	9mg /g
最低定量浓度（0.5g样品）	35mg/g	25mg /g	30mg /g

3　试剂和材料

　　除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为一级实验用水。
　　3.1　苄索氯铵，纯度≥99%；劳拉氯铵，纯度≥99%；西他氯铵，纯度≥99%。
　　3.2　甲醇，色谱纯。
　　3.3　醋酸铵，色谱纯。
　　3.4　冰醋酸，优级纯。
　　3.5　标准储备液：取苄索氯铵、劳拉氯铵和西他氯铵各0.05g，精确至0.0001g，置50 mL棕色容量瓶中，用甲醇（3.2）溶解并定容，摇匀，配成质量浓度为1g/L的标准储备溶液。
　　3.6　标准工作溶液：配制浓度分别为5mg/mL、20mg/mL、30mg/mL、50mg/mL、80mg/mL和100 mg/mL的苄索氯铵、劳拉氯铵和西他氯铵的混合标准工作溶液。

4　仪器

　　4.1　高效液相色谱仪：具有二极管阵列检测器。
　　4.2　分析天平：感量0.0001g。
　　4.3　分析天平：感量0.001g。
　　4.4　精密pH计：精度0.01。
　　4.5　涡旋振荡器。
　　4.6　超声波清洗器。

5　测定步骤

　　5.1　样品前处理

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