B1.2.2 RPR定量试验
B1.2.2.1 待测血清用等渗盐水在卡片上作5个稀释度:原血清、1∶2、1∶4、1∶8、1∶16。
B1.2.2.2 按定性试验步骤操作,以出现阳性反应的最高稀释度报告结果。
非梅毒螺旋体抗原试验,由于其敏感性较高,尚可在某些传染病及胶原病时出现假阳性反应,因之对阳性反应要结合临床进行鉴别。
本试验适用于一期梅毒(阳性率75%~85%)及二期梅毒(阳性率100%)诊断。也适用于疗效观察,判定复发及再感染的监测,由于操作简便,出结果快,亦适用于普查、婚检、产前检查及其他健康检查等。
B2 梅毒螺旋体抗原试验
因抗原是梅毒螺旋体,检测血清中抗梅毒螺旋体抗体,其敏感性和特异性均较高,现常用荧光螺旋体抗体吸收试验(Fluorescent Treponema Antibody-Absorption Test,简称FTA-ABS)及梅毒螺旋体血球凝集试验(Treponema Pallidum Hemagglutination Assay,简称TPHA)。
B2.1 FTA-ABS试验
B2.1.1 试验步骤
B2.1.1.1 将Nichol株梅毒螺旋体涂于载玻片上,丙酮固定。
B2.1.1.2 滴加经吸收剂处理的待检血清,室温孵育30min,使之与梅毒螺旋体发生抗原抗体反应,PBS冲洗(吸收剂由非致病性Reiter株螺旋体培养液制成,可以除去待检血清中的非特异性抗体)。
B2.1.1.3 载片的抗原抗体复合物上滴加荧光素标记的兔(或羊)抗人IgG,再室温孵育30min,PBS冲洗,甘油封片。
B2.1.1.4 荧光显微镜观察,如涂膜上梅毒螺旋体呈亮绿色,示阳性反应。无亮绿荧光着色,示阴性反应。
B2.2 TPHA试验
TPHA试剂盒含有:
a. 再化液(蒸馏水);
b. 吸收稀释液;
c. 致敏血球(冻干);
d. 未致敏血球(冻干);
e. 阳性对照血清(冻干);
f. 每滴为25μL校正过的滴管。
其他材料:U型微量血凝反应板(96孔)。
B2.2.1 TPHA定性试验步骤
B2.2.1.1 待检血清用吸收稀释液稀释成1∶20,2孔,室温孵育30min。
B2.2.1.2 于此2个孔分别加75μL未致敏血球及致敏血球。
B2.2.1.3 振荡,室温孵育2h,肉眼观察结果。
a. 阳性反应:红细胞光滑地覆盖整个孔底或其周围以红细胞环,为血凝现象。
b. 阴性反应:红细胞紧密地沉于孔底中央或无孔的钮扣状,为无血凝现象。
c. 可疑反应:孔底中央形成小的圆孔洞。